Plasmide CRISPR d'Activation (h) HIP1: sc-402515-ACT

La protéine humaine HIP1 (huntingtin-interacting protein 1) est un adaptateur de l’endocytose qui relie les composants des puits recouverts de clathrine à l’actine et aux récepteurs de cargaison, favorisant la formation de vésicules et le trafic intracellulaire. Par ses interactions avec la clathrine, AP2 et les membranes riches en phosphoinositides, HIP1 influence l’internalisation des récepteurs et la dynamique des signalisations en aval, notamment les voies liées au renouvellement des récepteurs aux facteurs de croissance. Une expression altérée de HIP1 ou des événements de fusion ont été associés à une signalisation dérégulée et à des phénotypes de prolifération cellulaire, ce qui en fait une cible pertinente pour l’étude de la transformation oncogénique et des défauts du trafic membranaire. HIP1 est également utilisé comme marqueur dans des travaux portant sur l’organisation du cytosquelette et la protéostasie, dans des contextes où la signalisation dépendante de l’endocytose est perturbée.

HIP1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de HIP1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

HIP1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus HIP1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription HIP1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de HIP1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus HIP1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de HIP1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie HIP1 dans les cellules tumorales présentant une expression de HIP1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.