HIF1a Double Nickase Plasmid (h): sc-400036-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das HIF1a Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- HIF1a Double-Nickase-Plasmid (h) und HIF1a Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf HIF1A abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: HIF1a: sc-13515
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
HIF1a Double Nickase Plasmid (h) | sc-400036-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
HIF1a Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400036-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
HIF1A kodiert den hypoxieinduzierbaren Faktor 1α (HIF1α), einen zentralen, sauerstoffsensitiven Transkriptionsfaktor, der sich bei niedrigem Sauerstoffgehalt anreichert und adaptive Genprogramme steuert, die Glykolyse, Angiogenese, Erythropoese und Zellüberleben regulieren. Stabilisiertes HIF1α bildet mit ARNT (HIF1β) ein Heterodimer und bindet an Hypoxie‑Response‑Elemente, um Zielgene wie VEGFA, SLC2A1 und LDHA zu regulieren, wobei es Signale aus PI3K–AKT–mTOR, MAPK und mitochondrialen ROS integriert. Unter Normoxie fördert die Prolyl‑Hydroxylierung die VHL‑vermittelte Ubiquitinierung und den proteasomalen Abbau, wodurch die Sauerstoffverfügbarkeit an die transkriptionelle Aktivität gekoppelt wird. Eine dysregulierte HIF1A/HIF1α‑Aktivität wird mit der Tumorhypoxie‑Biologie, ischämiebedingten Stressantworten, Entzündung und metabolischer Reprogrammierung in Verbindung gebracht und ist daher ein häufig genutztes Ziel in der Signalweg‑ und Krankheitsmodellforschung.
HIF1a Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des HIF1A-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von HIF1A abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die HIF1A-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit HIF1A-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.