Hic-5 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h): sc-402786

Visão geral

TGFB1I1 codifica a Hic-5, uma proteína adaptadora com domínio LIM presente em adesões focais e no núcleo, que coordena a sinalização dependente de integrinas com respostas transcricionais ao estresse mecânico. A Hic-5 atua como plataforma para complexos proteicos envolvidos na remodelação do citoesqueleto de actina, na renovação das adesões e na sinalização de GTPases da família Rho, influenciando o espalhamento celular, a migração e as interações com a matriz extracelular. Ela também se conecta a programas responsivos a TGF-β e a vias relacionadas que moldam fenótipos fibróticos e semelhantes à transição epitélio–mesênquima. A atividade desregulada de Hic-5 tem sido associada a alterações no remodelamento estromal e a comportamento celular invasivo em múltiplos contextos relevantes para doenças, sustentando seu uso como alvo de mecanotransdução e de co-regulação transcricional em modelos de células humanas.

O Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO Hic-5 (h) é um conjunto de plasmídeos concebido para a interrupção direcionada do gene TGFB1I1 em linhas celulares human. Cada plasmídeo coexpressa um RNA guia único (sgRNA) direcionado a um local distinto dentro do TGFB1I1, juntamente com a nuclease Cas9 de Streptococcus pyogenes. Os plasmídeos também codificam GFP, permitindo a identificação fluorescente e o enriquecimento de células transfectadas com sucesso por microscopia de fluorescência ou citometria de fluxo.

O design multiguia aumenta a probabilidade de gerar inserções ou deleções (indels) que interrompem o quadro de leitura aberto do TGFB1I1 na sequência da formação de quebras de cadeia dupla mediadas por Cas9. As quebras de ADN introduzidas pelo sistema CRISPR/Cas9 são reparadas através de vias endógenas de junção de extremidades não homólogas (NHEJ), resultando frequentemente em mutações de deslocamento de quadro que abolir a expressão da proteína Hic-5.

Este sistema de knockout CRISPR permite a geração eficiente de modelos celulares com deficiência de TGFB1I1 para a investigação da sinalização de Hic-5, estudos de genómica funcional, investigação em biologia do cancro e avaliação de respostas terapêuticas em linhas celulares humanas.

Características principais

• sgRNAs direcionados para o(s) exão(ões) TGFB1I1 críticos para a função Hic-5
  Coexpressão de SpCas9 e sgRNA a partir de um único plasmídeo para simplificar a administração
  Repórter GFP para identificação de células transfectadas
  Conjunto de plasmídeos direcionados para múltiplos locais genómicos TGFB1I1 para melhorar a eficiência do knockout
  Compatível com administração por transfecção

Variantes de Design

CRISPRs +/- HDRs

• Os gRNAs codificados pelo Hic-5 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h) e pelo Hic-5 Plasmídeo CRISPR/Cas9 KO (h2) têm como alvo locais distintos dentro do locus TGFB1I1. Pode estar disponível um ou ambos os designs de alvo. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.
  As construções doadoras HDR codificadas pelo Hic-5 Plasmídeo HDR (h) e o Plasmídeo HDR Hic-5 (h2) contêm uma cassete de resistência à puromicina e um repórter RFP flanqueado por braços de homologia TGFB1I1 para suportar a reparação dirigida por homologia em locais-alvo TGFB1I1 definidos, correspondentes aos desenhos de KO CRISPR/Cas9. A disponibilidade do doador HDR pode variar. Consulte Produtos Relacionados para verificar a disponibilidade.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.