Plásmido Doble Nickase (m) HGK: sc-424141-NIC
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (m)HGK consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa HGK (m) y el plásmido de doble nickasa HGK (m2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a Map4k4. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (m) HGK | sc-424141-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (m2) HGK | sc-424141-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Map4k4 codifica la quinasa de serina/treonina HGK (MAP4K4), un regulador aguas arriba de la señalización MAPK que conecta señales extracelulares con la activación de las vías JNK y p38 y con programas transcripcionales posteriores. En células de ratón, HGK integra señales de citocinas y del estrés celular para modular la remodelación del citoesqueleto, la migración y las respuestas inflamatorias, y puede influir en la apoptosis y la homeostasis metabólica mediante el “cross-talk” entre redes de quinasas. Estudios genéticos y funcionales asocian Map4k4 con procesos relevantes para la sensibilidad a la insulina, la biología del tejido adiposo y del músculo, la función endotelial y la activación de células inmunitarias, lo que lo convierte en un nodo útil para diseccionar jerarquías de señalización impulsadas por quinasas. La actividad alterada de MAP4K4 se ha implicado en mecanismos subyacentes a fenotipos de enfermedades cardiometabólicas e inflamatorias en modelos experimentales, lo que respalda su amplia relevancia en la investigación centrada en vías de señalización.
HGK El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Map4k4 en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Map4k4. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Map4k4. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Map4k4 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.