Plasmide Double Nickase (h) HGFA: sc-404422-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) HGFA correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide HGFA Double Nickase (h) et le plasmide HGFA Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant HGFAC. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: HGFA Antibody (B-6): sc-515126
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) HGFA | sc-404422-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) HGFA | sc-404422-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
HGFAC code l’activateur du facteur de croissance des hépatocytes (HGFA), une protéase à sérine sécrétée qui convertit le pro-HGF à chaîne unique en HGF actif, renforçant ainsi la signalisation du récepteur MET. Cette étape protéolytique relie les réseaux de protéases extracellulaires aux voies en aval qui contrôlent les interactions épithélio-mésenchymateuses, la motilité cellulaire, la prolifération et le remodelage tissulaire, avec un dialogue croisé avec des cascades associées à la coagulation et à la fibrinolyse. Une activité dérégulée de l’axe HGF/HGFA–MET a été impliquée dans une signalisation stromal–épithéliale anormale, des programmes de croissance invasive et des réponses régénératives altérées, faisant de HGFAC un point d’intérêt pour des études mécanistiques de la protéolyse péricellulaire et de l’activation des facteurs de croissance dans les cellules humaines.
HGFA Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus HGFAC dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de HGFAC. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de HGFAC. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de HGFAC.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.