Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
Non dati CRISPR: l'immagine illustra la qualità degli anticorpi per la visualizzazione dei risultati degli esperimenti CRISPR.
HERG Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-401143
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- HERG Il plasmide CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) è un pool di plasmidi, ciascuno dei quali codifica la nucleasi Cas9 e un RNA guida (gRNA) specifico per il bersaglio di 20 nt, progettato per la massima efficienza di knockout utilizzando sequenze derivate dalla libreria GeCKO v2
- Le sequenze gRNA indirizzano Cas9 a indurre rotture a doppio filamento (DSB) sito-specifiche nel locus genomico HERG, con conseguente knockout genico tramite giunzione non omologa (NHEJ)
- I geni di resistenza alla puromicina e RFP sono fiancheggiati da siti LoxP, consentendo la rimozione dei marcatori di selezione tramite la ricombinasi Cre (Cre Vector: sc-418923) dopo aver stabilito linee cellulari knockout stabili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: HERG Antibody (F-12): sc-377388
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
HERG Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h) | sc-401143 | 20 µg | $397.00 |
Panoramica
KCNH2 codifica il canale del potassio umano HERG voltaggio‑dipendente (Kv11.1), un mediatore chiave della corrente rettificante ritardata rapida (IKr) che modella la ripolarizzazione di fase 3 del potenziale d’azione cardiaco. L’attività di HERG si integra con reti più ampie di canali ionici e programmi di eccitabilità di membrana per controllare la durata del potenziale d’azione, la refrattarietà e la ritmicità. Un’alterazione della funzione di KCNH2 è fortemente associata a fenotipi aritmici ereditari e acquisiti, inclusa la sindrome del QT lungo, e rappresenta un nodo centrale nella ricerca di elettrofisiologia e farmacologia della sicurezza. Al di là dei cardiomiociti, l’espressione di KCNH2 è stata esaminata in contesti eccitabili e non eccitabili in cui la conduttanza del potassio influenza la proliferazione e gli stati di segnalazione cellulare.
Il plasmide CRISPR/Cas9 KO HERG (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene KCNH2 in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del KCNH2 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.
Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto KCNH2 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina HERG.
Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di KCNH2 per lo studio della segnalazione di HERG, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.
Caratteristiche principali
- sgRNA mirati agli esoni KCNH2 critici per la funzione di HERG
Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di KCNH2 per migliorare l'efficienza del knockout
Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione
Varianti di progettazione
CRISPR +/- HDR
- Gli gRNA codificati dal HERG CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal HERG CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus KCNH2. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
I costrutti donatori HDR codificati dal HERG Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR HERG (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia KCNH2 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio KCNH2 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.