Plásmido Doble Nickase (h) Hepsin: sc-405081-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)Hepsin consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa Hepsin (h) y el plásmido de doble nickasa Hepsin (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a HPN. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: Hepsin Anticuerpo (2D5): sc-517056
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) Hepsin | sc-405081-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) Hepsin | sc-405081-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
HPN codifica la hepsina, una proteasa serina transmembrana de tipo II enriquecida en la superficie celular, donde participa en la proteólisis pericelular, la remodelación de la matriz extracelular y la regulación de las interacciones célula–célula y célula–matriz. La hepsina puede influir en la señalización activada por proteasas y en la disponibilidad de factores de crecimiento al procesar sustratos extracelulares, lo que la vincula con vías que moldean la diferenciación epitelial, la arquitectura tisular y el comportamiento invasivo. Se han descrito una expresión desregulada de HPN y una actividad alterada de la hepsina en múltiples neoplasias epiteliales, lo que la convierte en un recurso molecular útil para estudiar redes de proteasas asociadas a tumores y el crosstalk con el microambiente. En investigación biomédica, HPN se examina con frecuencia por sus funciones en cascadas de proteasas ancladas a la membrana, la migración celular y la proteostasis en la membrana plasmática.
Hepsin El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus HPN en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de HPN. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de HPN. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con HPN alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.