Plásmido CRISPR de Activación (h) Hepatic Lipase: sc-403928-ACT

LIPC codifica la lipasa hepática, una enzima lipolítica asociada al hígado y al endotelio que hidroliza triglicéridos y fosfolípidos en las lipoproteínas circulantes, remodelando así las partículas de HDL y las que contienen apoB. A través de su acción en la superficie de los hepatocitos y dentro del compartimento vascular, la lipasa hepática contribuye a la captación de lipoproteínas, al transporte inverso de colesterol y a una homeostasis lipídica más amplia. Las variaciones en la expresión o la actividad de LIPC se han relacionado con perfiles lipídicos plasmáticos alterados, incluidos cambios en el colesterol HDL y en las lipoproteínas ricas en triglicéridos, lo que vincula esta vía con fenotipos cardiometabólicos. Como regulador nodal del metabolismo de las lipoproteínas, LIPC se estudia con frecuencia en la biología del hepatocito, el tráfico lipídico y las redes transcripcionales sensibles a nutrientes.

Hepatic Lipase El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de LIPC sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Hepatic Lipase El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus LIPC en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional LIPC, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Hepatic Lipase. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo LIPC y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Hepatic Lipase en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Hepatic Lipase en células tumorales con expresión de LIPC silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.