Hemoglobin δ Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-401567-ACT

HBD codifica a cadeia globínica delta da hemoglobina humana, um componente central da hemoglobina adulta A2 que contribui para o transporte de oxigênio nos eritrócitos e para a homeostase redox. A expressão da globina delta é estreitamente acoplada aos programas de diferenciação eritroide e à transcrição mediada pela região de controle do locus das globinas, integrando-se às vias de biossíntese do heme, manejo do ferro e montagem da hemoglobina. Variações na expressão ou na sequência de HBD podem influenciar a composição da hemoglobina e servem como um indicador molecular em estudos sobre a troca de globinas e a eritropoiese. O desequilíbrio entre cadeias globínicas é relevante para distúrbios hereditários da hemoglobina, nos quais alterações compensatórias em frações menores de hemoglobina são frequentemente investigadas como modificadoras da biologia da doença.

Hemoglobin δ O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de HBD sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Hemoglobin δ O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus HBD em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição HBD, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Hemoglobin δ. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus HBD nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Hemoglobin δ no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Hemoglobin δ em células tumorais com expressão de HBD silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.