Hemoglobin α1 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-420800

Descripción general

Hba-a1 codifica la subunidad α1 de la hemoglobina del ratón, un componente esencial del tetrámero de hemoglobina adulta que se une al hemo y permite el transporte reversible de oxígeno en los eritrocitos. Su expresión está estrechamente coordinada durante la eritropoyesis con los genes de β-globina y las enzimas de la biosíntesis del hemo, lo que vincula a Hba-a1 con la regulación de los genes de globina, el manejo del hierro y la maduración de los glóbulos rojos. La alteración de la dosis de α-globina perturba el ensamblaje de la hemoglobina y el equilibrio redox, promoviendo una eritropoyesis ineficaz y fenotipos de estrés hemolítico que modelan características de la α-talasemia y de la biología de anemias relacionadas. Como gen de alta expresión y restringido a un linaje, Hba-a1 se utiliza comúnmente para investigar la arquitectura reguladora del locus de la α-globina y los mecanismos que gobiernan la diferenciación eritroide.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Hemoglobin α1 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Hba-a1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Hba-a1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Hba-a1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Hemoglobin α1.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Hba-a1 para la investigación de la señalización de Hemoglobin α1, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Hba-a1 críticos para la función de Hemoglobin α1
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Hba-a1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Hemoglobin α1 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido Hemoglobin α1 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Hba-a1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Hemoglobin α1 (m) y el plásmido HDR Hemoglobin α1 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Hba-a1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Hba-a1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.