HEMK2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-406503

Übersicht

N6AMT1 (auch bekannt als HEMK2) kodiert eine Methyltransferase, die die Proteinmethylierung katalysiert und damit zur Regulation der Translationsgenauigkeit sowie ribosomenassoziierter Prozesse beiträgt. HEMK2 wurde mit der Methylierung von Komponenten der Translationsbeendigung und des Ribosoms in Verbindung gebracht und ist dadurch an Proteostase‑Signalwege und zelluläre Stressantworten gekoppelt, die auf eine präzise Proteinsynthese angewiesen sind. Veränderte N6AMT1/HEMK2‑Aktivität wurde in Zusammenhängen untersucht, die die Genomstabilität, mitochondriale und oxidative Stresssignalwege sowie eine dysregulierte Wachstumskontrolle betreffen, was sie für mechanistische Arbeiten in der Krebsbiologie und anderen Erkrankungen mit gestörter Proteomhomöostase relevant macht. Seine enzymatische Funktion und breite zelluläre Einbindung unterstützen seine Nutzung als Knotenpunkt zur Untersuchung posttranslationaler Modifikationsnetzwerke und nachgeschalteter transkriptioneller sowie metabolischer Anpassungen.

Das HEMK2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des N6AMT1-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des N6AMT1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von N6AMT1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die HEMK2-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von N6AMT1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der HEMK2-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf N6AMT1-Exone abzielen, die für die HEMK2-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere N6AMT1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom HEMK2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom HEMK2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des N6AMT1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das HEMK2 HDR-Plasmid (h) und HEMK2 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von N6AMT1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten N6AMT1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.