Plasmide Double Nickase (h2) Helios: sc-402984-NIC-2

Chez l’humain, IKZF2 code Helios, un facteur de transcription à doigts de zinc de la famille Ikaros, qui se lie à l’ADN pour réguler des programmes d’expression génique contrôlant l’engagement de la lignée lymphocytaire, la maturation des thymocytes et la spécialisation fonctionnelle des lymphocytes T. Helios participe à des réseaux transcriptionnels associés à la chromatine qui façonnent l’activation induite par le TCR, les réponses à la signalisation des cytokines et le contrôle épigénétique de la tolérance immunitaire, avec des rôles majeurs dans la stabilité des lymphocytes T régulateurs et l’homéostasie immunitaire. Des altérations de l’expression ou de l’activité d’IKZF2/Helios ont été associées à des contextes de dérégulation immunitaire et d’hémopathies malignes, notamment via des modifications des états de différenciation des cellules T et des profils transcriptionnels leucémiques. Les outils de recherche dédiés à IKZF2 soutiennent des études mécanistiques de l’occupation du facteur de transcription, des circuits de régulation génique et des transitions d’état cellulaire dans des modèles d’immunologie humaine, au moyen de perturbations basées sur CRISPR, d’essais rapporteurs et de profils multi-omiques.

Helios Le plasmide double nickase (h2) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus IKZF2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de IKZF2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de IKZF2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de IKZF2.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.