Plásmido Doble Nickase (h) HECTD1: sc-409864-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)HECTD1 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa HECTD1 (h) y el plásmido de doble nickasa HECTD1 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a HECTD1. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: HECTD1 Anticuerpo (1E10): sc-517169
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) HECTD1 | sc-409864-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) HECTD1 | sc-409864-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
HECTD1 codifica una ligasa E3 de ubiquitina con dominio HECT que regula la ubiquitinación de proteínas y su recambio dependiente del proteasoma, moldeando la transducción de señales y la organización del citoesqueleto. Como modulador del control de calidad impulsado por ubiquitina, HECTD1 se ha vinculado a procesos como la señalización de respuesta al estrés, la migración celular y la regulación del desarrollo, mediante el control de la estabilidad y el tráfico de sus sustratos. La alteración de la actividad de HECTD1 puede modificar la dinámica de rutas que influyen en la progresión del ciclo celular y en programas morfogenéticos, lo que la hace relevante para estudios de crecimiento desregulado y patrón tisular. Su función como ligasa de ubiquitina también sitúa a HECTD1 como un nodo útil para investigar la interacción entre la ubiquitinación, la homeostasis proteica y las respuestas transcripcionales.
HECTD1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus HECTD1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de HECTD1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de HECTD1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con HECTD1 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.