Plasmide CRISPR d'Activation (h) HCN1: sc-404539-ACT

HCN1 code le canal 1 activé par l’hyperpolarisation et modulé par les nucléotides cycliques (Hyperpolarization-activated Cyclic Nucleotide–gated channel 1), un canal cationique voltage-dépendant qui conduit le courant Ih et contribue à établir le potentiel de membrane au repos, l’intégration dendritique et la décharge rythmique dans les cellules excitables. L’activité du canal est modulée par l’hyperpolarisation membranaire et les nucléotides cycliques intracellulaires, reliant la signalisation électrique à des voies de seconds messagers telles que la régulation de l’excitabilité dépendante de l’AMPc. Dans le système nerveux, HCN1 participe à la réponse synaptique et aux oscillations des réseaux qui façonnent le traitement sensoriel et la cognition. Une expression ou une fonction dérégulée de HCN1 a été impliquée dans des altérations de l’excitabilité neuronale et des phénotypes liés aux crises, ce qui soutient sa pertinence dans l’étude des canalopathies et de la neurophysiologie.

HCN1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de HCN1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

HCN1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus HCN1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription HCN1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de HCN1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus HCN1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de HCN1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie HCN1 dans les cellules tumorales présentant une expression de HCN1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.