Plasmide Double Nickase (h) HBXIP: sc-405228-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) HBXIP correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide HBXIP Double Nickase (h) et le plasmide HBXIP Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant LAMTOR5. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: HBXIP Antibody (H-5): sc-373980
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) HBXIP | sc-405228-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) HBXIP | sc-405228-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
LAMTOR5 code HBXIP, un composant du complexe Ragulator localisé sur les endosomes tardifs/lysosomes, qui soutient l’activation de mTORC1 dépendante des acides aminés et coordonne la détection des nutriments avec la croissance cellulaire et le métabolisme. HBXIP participe également au trafic endosomal et il a été rapporté qu’il module des processus transcriptionnels et associés au cycle cellulaire via des interactions protéine‑protéine. Par ces rôles, LAMTOR5/HBXIP relie la signalisation lysosomale à des programmes prolifératifs et métaboliques, ce qui le rend pertinent pour l’étude de la signalisation oncogénique, de l’adaptation au stress et de l’utilisation altérée des nutriments observées dans de multiples contextes pathologiques. Son implication dans les réseaux liés à mTOR le relie également à la régulation de l’autophagie et à la dynamique des signalisations associées au lysosome.
HBXIP Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus LAMTOR5 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de LAMTOR5. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de LAMTOR5. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de LAMTOR5.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.