Partículas Lentivirales de Activación (h) HB9: sc-402097-LAC

MNX1 codifica el factor de transcripción homeobox HB9, un regulador de unión al ADN específico de secuencia que controla programas de expresión génica del desarrollo en la médula espinal ventral y en la especificación de neuronas motoras, así como en la diferenciación del linaje pancreático. HB9 se integra en redes más amplias de genes homeobox y de diferenciación neuronal para coordinar decisiones de destino celular, programas de guía axonal y cascadas transcripcionales asociadas a la maduración. La expresión desregulada de MNX1 o la actividad alterada de HB9 se han asociado con defectos del neurodesarrollo y con la reprogramación transcripcional oncogénica en determinadas neoplasias, donde puede influir en la proliferación y la identidad de linaje. Estos vínculos biológicos hacen de MNX1/HB9 un nodo útil para estudiar el control transcripcional de la diferenciación, el desarrollo de circuitos neuronales y la regulación génica dependiente del contexto.

Las partículas de activación lentiviral HB9 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de MNX1 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral HB9 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción MNX1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de HB9. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo MNX1 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.