Plasmide CRISPR/Cas9 KO HB9 (h): sc-402097

Présentation

MNX1 code le facteur de transcription à homéoboîte HB9, un régulateur se liant à l’ADN, essentiel à la mise en place des structures embryonnaires et à la spécification des lignages, en particulier au sein des motoneurones en développement de la moelle épinière et des progéniteurs pancréatiques. HB9 contrôle des programmes transcriptionnels qui régissent la différenciation neuronale, le guidage axonal et la restriction du destin cellulaire, en coordonnant des réseaux en aval de régulateurs du développement. Une expression dérégulée de MNX1 ou une activité aberrante de HB9 a été associée à des états de différenciation altérés et à des programmes transcriptionnels oncogéniques dans des contextes de tumeurs hématologiques et solides. En tant que facteur de transcription du développement, MNX1 est fréquemment étudié afin de définir des circuits de régulation génique, des transitions d’état de la chromatine et des effets dépendants du contexte sur la prolifération et la différenciation.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO HB9 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène MNX1 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du MNX1, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert MNX1 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine HB9.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en MNX1 pour l'étude de la signalisation de HB9, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de MNX1 essentiels à la fonction de HB9
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de MNX1 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le HB9 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le HB9 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus MNX1. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le HB9 plasmide HDR (h) et le HB9 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie MNX1 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles MNX1 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.