Plasmide Double Nickase (m) HAUSP: sc-434244-NIC

Le gène murin **Usp7** code la déubiquitinase **HAUSP**, une protéase spécifique de l’ubiquitine qui régule la stabilité des protéines au sein de multiples réseaux de signalisation nucléaires. HAUSP module l’axe **p53–MDM2**, affecte les réponses aux dommages de l’ADN et influence la progression du cycle cellulaire en inversant l’ubiquitination de substrats clés, façonnant ainsi la protéostase et les programmes transcriptionnels. Elle participe aussi à des processus associés à la chromatine et a été reliée à des voies contrôlant l’apoptose, le stress de réplication et la signalisation immunitaire via la déubiquitination de facteurs régulateurs. Une activité **USP7/HAUSP** dérégulée est fréquemment étudiée dans le contexte de défauts d’intégrité du génome et de réseaux de signalisation associés aux tumeurs, ce qui en fait un nœud utile pour des études mécanistiques du contrôle dépendant de l’ubiquitine.

HAUSP Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Usp7 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Usp7. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Usp7. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Usp7.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.