Plasmide CRISPR d'Activation (h) HAT1: sc-402357-ACT

HAT1 humain (histone acétyltransférase 1) est une HAT de type B qui acétyle l’histone H4 nouvellement synthétisée (principalement sur les Lys5 et Lys12) et contribue à l’assemblage de la chromatine lors de la réplication et de la réparation de l’ADN. En coordonnant le dépôt des histones et la maturation des nucléosomes, HAT1 favorise la stabilité du génome et régule l’accessibilité de la chromatine, ce qui influence les programmes transcriptionnels. Son activité s’articule avec l’assemblage de la chromatine couplé à la réplication, les processus de réponse aux dommages de l’ADN et, plus largement, la régulation épigénétique via le recrutement de facteurs de la chromatine dépendant de l’acétylation. Une dérégulation des voies d’acétylation des histones impliquant HAT1 a été associée à une prolifération altérée, à un stress réplicatif et à des états épigénétiques liés à la biologie des cancers et à d’autres troubles associés à la chromatine.

HAT1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de HAT1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

HAT1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus HAT1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription HAT1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de HAT1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus HAT1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de HAT1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie HAT1 dans les cellules tumorales présentant une expression de HAT1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.