Plasmide Double Nickase (m) Haspin: sc-420703-NIC
- Espèces cibles: mouse
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (m) Haspin correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide Haspin Double Nickase (m) et le plasmide Haspin Double Nickase (m2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant Gsg2. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (m) Haspin | sc-420703-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (m2) Haspin | sc-420703-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Le gène murin **Gsg2** code la **Haspin**, une kinase sérine/thréonine atypique qui orchestre la dynamique des chromosomes en mitose en phosphorylant l’histone H3 sur la thréonine 3, une modification qui favorise le recrutement du complexe des passagers chromosomiques et soutient une cohésion et une ségrégation fidèles des chromatides sœurs. Via cet axe de phosphorylation H3T3, Haspin s’interface avec des réseaux de signalisation centromériques impliquant l’activité d’Aurora B, le contrôle du point de contrôle du fuseau et la stabilité des attachements kinétochore–microtubule. La perturbation de la régulation mitotique dépendante de Haspin peut entraîner une instabilité chromosomique et une aneuploïdie, reliant la fonction de Gsg2/Haspin à des voies largement pertinentes pour le maintien du génome et le stress prolifératif. Ainsi, **Gsg2** est fréquemment étudié dans le cadre de la régulation du cycle cellulaire, des interactions (crosstalk) entre phosphorylations de la chromatine et des modèles mécanistiques de la fidélité mitotique chez les cellules de mammifères.
Haspin Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Gsg2 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Gsg2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Gsg2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Gsg2.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.