HAO2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-405855

Übersicht

HAO2 (Hydroxyacid Oxidase 2) kodiert eine peroxisomale, FMN-abhängige Oxidase, die an der Oxidation von 2‑Hydroxyfettsäuren beteiligt ist und dadurch zum Lipidabbau sowie zur peroxisomenvermittelten Redoxhomöostase beiträgt. Durch die Entstehung von Wasserstoffperoxid während der Substratoxidation ist HAO2 mit der zellulären Kontrolle von oxidativem Stress und mit Stoffwechselanpassungswegen verknüpft, die an die Peroxisomenfunktion gekoppelt sind. Eine veränderte HAO2-Expression wurde mit metabolischer Reprogrammierung in der Leberbiologie in Verbindung gebracht und in mehreren transkriptomischen Studien zum hepatozellulären Karzinom beschrieben, was seinen Einsatz als Marker zur Untersuchung tumorassoziierter Stoffwechselzustände unterstützt. Eine Störung oder Modulation von HAO2 ist daher nützlich, um den peroxisomalen Lipidstoffwechsel, den Umgang mit reaktiven Sauerstoffspezies und nachgeschaltete Signalfolgen in humanen Zellmodellen zu untersuchen.

Das HAO2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des HAO2-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des HAO2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von HAO2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die HAO2-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von HAO2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der HAO2-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf HAO2-Exone abzielen, die für die HAO2-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere HAO2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom HAO2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom HAO2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des HAO2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das HAO2 HDR-Plasmid (h) und HAO2 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von HAO2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten HAO2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.