Plasmide CRISPR d'Activation (h) HADHB: sc-403234-ACT

HADHB code la sous-unité bêta de la protéine mitochondriale trifonctionnelle, un composant central de la β‑oxydation des acides gras à longue chaîne qui catalyse, de concert avec HADHA, les étapes d’hydratase énoyl‑CoA et de déshydrogénase 3‑hydroxyacyl‑CoA. Ce complexe enzymatique contribue à l’homéostasie énergétique en orientant les acyl‑CoA à longue chaîne vers la production d’acétyl‑CoA, couplant ainsi le catabolisme lipidique à la respiration mitochondriale et à la flexibilité métabolique. Une altération de la fonction de HADHB est associée à des troubles mitochondriaux de l’oxydation des acides gras et à des phénotypes de stress métabolique, notamment une production d’énergie diminuée lors du jeûne ou en conditions de forte demande. Dans les systèmes expérimentaux, l’expression et l’activité de HADHB sont couramment étudiées dans le contexte du métabolisme mitochondrial, de l’équilibre redox et des réponses de signalisation induites par les lipides.

HADHB Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de HADHB sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

HADHB Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus HADHB dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription HADHB, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de HADHB. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus HADHB natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de HADHB au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie HADHB dans les cellules tumorales présentant une expression de HADHB silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.