Plasmide Double Nickase (h) HADHA: sc-402803-NIC

HADHA code la sous-unité alpha de la protéine mitochondriale trifonctionnelle, un composant central de la β‑oxydation des acides gras qui catalyse les étapes d’hydratation de l’énoyl‑CoA et de déshydrogénation du 3‑hydroxyacyl‑CoA nécessaires au métabolisme des acyl‑CoA d’acides gras à longue chaîne. En s’associant à HADHB, HADHA contribue à l’homéostasie énergétique en période de jeûne et lors d’une forte demande oxydative, reliant le catabolisme lipidique à la fonction mitochondriale et à l’équilibre rédox. Une altération de HADHA est associée à des troubles mitochondriaux de l’oxydation des acides gras, notamment le déficit en 3‑hydroxyacyl‑CoA déshydrogénase des chaînes longues et le déficit en protéine trifonctionnelle mitochondriale, pouvant se manifester par une cardiomyopathie, une hypoglycémie hypokétosique et une myopathie. HADHA est donc largement étudié dans les réponses au stress métabolique, la protéostasie mitochondriale et la signalisation induite par les lipides, pertinentes pour la biologie neuromusculaire et cardiaque.

HADHA Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus HADHA dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de HADHA. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de HADHA. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de HADHA.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.