Plasmide CRISPR/Cas9 KO GW182 (h): sc-400906

Présentation

TNRC6A code pour GW182, un composant d’échafaudage essentiel du complexe d’inhibition induit par les microARN, qui coordonne la répression génique post‑transcriptionnelle. GW182 se lie aux protéines Argonaute et recrute les complexes deadénylases CCR4–NOT et PAN2–PAN3, favorisant la deadénylation des ARNm, la décapuchonnage et l’inhibition de la traduction au sein des P-bodies cytoplasmiques. Grâce à ces interactions, TNRC6A contribue à façonner des programmes d’expression génique contrôlés par les microARN, qui influencent le contrôle du cycle cellulaire, la différenciation, les réponses au stress et la signalisation de l’immunité innée. La dérégulation des réseaux d’inhibition associés à GW182 a été liée à une régulation aberrante du transcriptome observée dans de multiples contextes pathologiques, notamment le cancer et des troubles neurologiques, faisant de TNRC6A un nœud utile pour des études mécanistiques en biologie de l’ARN.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO GW182 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène TNRC6A dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du TNRC6A, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert TNRC6A à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine GW182.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en TNRC6A pour l'étude de la signalisation de GW182, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de TNRC6A essentiels à la fonction de GW182
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de TNRC6A pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le GW182 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le GW182 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus TNRC6A. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le GW182 plasmide HDR (h) et le GW182 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie TNRC6A pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles TNRC6A définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.