Plásmido CRISPR de Activación (h) GTPBP4: sc-408845-ACT

El gen humano **GTPBP4** codifica una NTPasa nucleolar tipo P-loop que se asocia con partículas preribosomales y favorece la maduración de la subunidad ribosomal grande 60S. A través de sus funciones en el procesamiento del rRNA y la biogénesis ribosomal, GTPBP4 influye en la capacidad de traducción, la proteostasis y la progresión del ciclo celular en condiciones de crecimiento y de estrés. La alteración de la función nucleolar y del ensamblaje de ribosomas es un sello distintivo de múltiples estados proliferativos y de respuesta al estrés, lo que convierte a GTPBP4 en un nodo útil para analizar los vínculos entre la vigilancia nucleolar, la señalización asociada a p53 y el control global de la traducción. La regulación anómala de factores de biogénesis ribosomal, incluidas GTPasas como GTPBP4, se ha relacionado en la literatura con programas oncogénicos y con cambios en la aptitud celular, lo que respalda su relevancia para estudios mecanísticos en modelos de enfermedad.

GTPBP4 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de GTPBP4 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

GTPBP4 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus GTPBP4 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional GTPBP4, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de GTPBP4. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo GTPBP4 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de GTPBP4 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía GTPBP4 en células tumorales con expresión de GTPBP4 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.