Particules Lentivirales d'Activation (m2) G_{γ 10}: sc-420613-LAC-2

Le gène murin Gng10 code la sous-unité γ10 des protéines G hétérotrimériques, un composant ancré à la membrane de la signalisation des RCPG qui s’assemble avec des sous-unités Gβ pour former des complexes Gβγ contrôlant la propagation des signaux dépendante des récepteurs. Les complexes Gβγ issus d’hétérotrimères contenant GNG10 modulent des effecteurs tels que les canaux ioniques, les adénylyl-cyclases et la phospholipase Cβ, en façonnant des voies de seconds messagers qui régulent l’excitabilité neuronale, la sécrétion et la dynamique du cytosquelette. Des altérations de la composition des sous-unités des protéines G et de la signalisation Gβγ ont été impliquées dans des troubles touchant le neurodéveloppement et le traitement sensoriel, ainsi que dans une migration et une prolifération cellulaires dérégulées, faisant de Gng10 une cible pertinente pour des études mécanistiques. L’édition du gène Gng10 dans des modèles murins permet d’analyser finement les voies des réseaux de RCPG, de cartographier les interactions protéine–protéine au sein des complexes de protéines G et de mener des criblages de génomique fonctionnelle reliant les signaux d’entrée des récepteurs à des phénotypes transcriptionnels et électrophysiologiques en aval.

Les particules d'activation lentivirales Gγ 10 (m2) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de Gng10 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales Gγ 10 (m2) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription Gng10, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de Gγ 10. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif Gng10 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.