G_{β 5} CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-420611

Übersicht

Gnb5 kodiert die Gβ5‑Untereinheit, eine atypische G‑Protein‑Beta‑Komponente, die obligate Komplexe mit RGS‑Proteinen der R7‑Familie bildet, um die GTP‑Hydrolyse von Gα zu beschleunigen und die Beendigung von GPCR‑Signalen zu präzisieren. In Mauszellen regulieren Gβ5–RGS‑Assemblies die Kinetik und Amplitude von cAMP‑ und Ca²⁺‑gekoppelten Signalwegen nachgeschaltet von Neurotransmitter‑ und Sensorikrezeptoren und formen so die neuronale Erregbarkeit und synaptische Transmission. Durch die Kontrolle GPCR‑getriebener Signalwege beeinflusst Gβ5 Signalprozesse auf Netzwerkebene, darunter Neuromodulation und Stimulusadaptation. Eine Dysregulation der GNB5‑assoziierten Signalübertragung wurde mit neuroentwicklungsbezogenen und sensorischen Phänotypen in Verbindung gebracht, was seine Relevanz für mechanistische Studien zur zeitlichen Dynamik von GPCR‑Signalen und zur Funktion neuronaler Schaltkreise unterstreicht.

Das Gβ 5 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Gnb5-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Gnb5-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Gnb5 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Gβ 5-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Gnb5-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Gβ 5-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Gnb5-Exone abzielen, die für die Gβ 5-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Gnb5-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Gβ 5 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom Gβ 5 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Gnb5-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Gβ 5 HDR-Plasmid (m) und Gβ 5 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Gnb5-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Gnb5-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.