Plásmido Doble Nickase (h) Gα t2 : sc-401528-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)Gα t2 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa Gα t2 (h) y el plásmido de doble nickasa Gα t2 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a GNAT2. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) Gα t2 | sc-401528-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) Gα t2 | sc-401528-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GNAT2 codifica la subunidad humana Gαt2 (Gαt2), una subunidad α de proteína G heterotrimérica conocida principalmente por acoplar las opsinas activadas a enzimas efectoras aguas abajo en la fototransducción. Tras la activación de un GPCR, Gαt2 favorece la señalización a través del metabolismo de nucleótidos cíclicos y la regulación relacionada de canales iónicos, lo que permite cambios rápidos en la excitabilidad celular dependientes del estímulo. Como parte de la arquitectura más amplia de señalización mediada por GPCR, GNAT2 ayuda a integrar la activación del receptor con vías de segundo mensajero y con el ciclo de la proteína G, mediado por la unión e hidrólisis de GTP. La alteración de componentes de señalización relacionados con la transducina se ha implicado en disfunciones del sistema visual y proporciona un marco para estudiar mecanismos de amplificación y adaptación de la señal impulsados por GPCR.
Gα t2 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus GNAT2 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de GNAT2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de GNAT2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con GNAT2 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.