Partículas Lentivirales de Activación (h) G_{α q}: sc-400500-LAC

GNAQ codifica la subunidad alfa Gαq de la proteína G heterotrimérica humana, un transductor central de señales desde numerosos GPCR hacia la fosfolipasa C-β. Tras la activación del receptor, Gαq promueve la hidrólisis de PIP2 a IP3 y DAG, lo que impulsa la movilización intracelular de Ca2+ y la activación de PKC para regular la secreción, la contractilidad y programas transcripcionales. La señalización downstream se integra con MAPK/ERK y otras cascadas de quinasas que moldean las respuestas de proliferación y diferenciación en diversos tipos celulares. La desregulación de la señalización de GNAQ y las variantes somáticas se han implicado en la biología de las células pigmentarias y en patologías asociadas al sistema vascular, lo que la convierte en un nodo interrogado con frecuencia en estudios de señalización impulsada por GPCR.

Las partículas de activación lentiviral Gα q (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de GNAQ en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral Gα q (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción GNAQ, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de Gα q. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo GNAQ y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.