Plásmido Doble Nickase (h) G_{α i-2}: sc-400568-NIC

GNAI2 codifica la subunidad alfa Gαi-2 de la proteína G heterotrimérica humana, un transductor de señales regulado por GDP/GTP que conecta los GPCR activados con la inhibición de la adenilil ciclasa y la disminución de la producción de AMPc. A través de su acoplamiento a vías dependientes de GPCR, Gαi-2 modula la señalización de PKA, la regulación de canales iónicos, las respuestas de MAPK y los procesos dependientes de PI3K, influyendo en la quimiotaxis, la secreción y las respuestas proliferativas en diversos tipos celulares. La actividad de GNAI2 también se integra con la desensibilización y el tráfico de receptores mediante la señalización de Gβγ y las redes GRK/β-arrestina, lo que ayuda a establecer la amplitud y la duración de la señalización. La desregulación de la señalización de Gαi-2 se ha asociado con alteraciones en la migración de células inmunitarias y con contextos de señalización de crecimiento aberrante, lo que respalda su estudio en mecanismos relacionados con la inflamación y la oncogénesis, sin implicar utilidad clínica.

Gα i-2 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus GNAI2 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de GNAI2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de GNAI2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con GNAI2 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.