G_{α i-2} Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-400568

Descripción general

GNAI2 codifica la subunidad alfa inhibidora de la proteína G humana Gα i-2, un transductor central de la señalización de los GPCR que suprime la actividad de la adenilil ciclasa para reducir el cAMP intracelular y modula respuestas posteriores vinculadas a PKA y MAPK. Mediante su acoplamiento a diversos receptores, Gα i-2 influye en la señalización del calcio, la regulación de canales iónicos, la quimiotaxis y la remodelación del citoesqueleto, dando forma a los programas de migración celular y activación de células inmunitarias. La señalización alterada de GNAI2 se ha asociado con vías inflamatorias desreguladas y una señalización proliferativa aberrante observada en múltiples contextos patológicos, incluidos cánceres y trastornos relacionados con el sistema inmunitario. Estas propiedades hacen de GNAI2 un nodo útil para desentrañar la organización de las vías de los GPCR, la dinámica de los segundos mensajeros y la plasticidad de la señalización dependiente del contexto en células humanas.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Gα i-2 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen GNAI2 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del GNAI2 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de GNAI2 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Gα i-2.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en GNAI2 para la investigación de la señalización de Gα i-2, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de GNAI2 críticos para la función de Gα i-2
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de GNAI2 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Gα i-2 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido Gα i-2 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus GNAI2. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Gα i-2 (h) y el plásmido HDR Gα i-2 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología GNAI2 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana GNAI2 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.