Plásmido Doble Nickase (h) Gα 14: sc-404556-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)Gα 14 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa Gα 14 (h) y el plásmido de doble nickasa Gα 14 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a GNA14. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) Gα 14 | sc-404556-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) Gα 14 | sc-404556-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GNA14 codifica la subunidad alfa Gα14 de las proteínas G heterotriméricas, un miembro de la familia Gq/11 que acopla los GPCR activados a la fosfolipasa C-β (PLCβ). A través de la generación dependiente de PLCβ de IP3 y diacilglicerol, Gα14 promueve la movilización intracelular de Ca2+ y la señalización de la proteína quinasa C, conectando las señales provenientes de los receptores con la activación de MAPK/ERK y con programas transcripcionales que determinan la proliferación, la diferenciación y las respuestas secretoras. La actividad de GNA14 es especialmente relevante en contextos en los que la señalización mediada por GPCR regula el tono vascular, la función endocrina y la activación de células inmunitarias. La desregulación de la señalización de la clase Gq, incluidas alteraciones que involucran a GNA14, se ha implicado en señales de crecimiento aberrantes y en la biología tumoral, lo que respalda su uso como un nodo para investigar vías impulsadas por GPCR.
Gα 14 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus GNA14 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de GNA14. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de GNA14. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con GNA14 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.