Plasmide Double Nickase (h) Gα 13: sc-401180-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) Gα 13 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide Gα 13 Double Nickase (h) et le plasmide Gα 13 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant GNA13. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: Gα 13 Antibody (6F6-B5): sc-293424
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) Gα 13 | sc-401180-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) Gα 13 | sc-401180-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GNA13 code pour la sous-unité alpha Gα13 des protéines G hétérotrimériques humaines, un transducteur clé des signaux émis par les RCPG couplés à la famille G12/13. Après activation, Gα13 recrute des RhoGEF afin de stimuler des voies dépendantes de RhoA qui régulent le remodelage du cytosquelette d’actine, l’adhérence cellulaire, la migration et la contractilité, avec des effets en aval sur des programmes transcriptionnels et la mécanotransduction. Cet axe de signalisation recoupe des voies contrôlant le tonus vasculaire, l’activation plaquettaire et le trafic des cellules immunitaires, et il est fréquemment étudié dans le contexte de la signalisation oncogénique via les RCPG et des altérations de la motilité cellulaire. Une activité dérégulée de GNA13 a été associée à une signalisation Rho aberrante et à des phénotypes pertinents pour la maladie, tels qu’un comportement invasif et une architecture tissulaire perturbée dans des systèmes modèles.
Gα 13 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus GNA13 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de GNA13. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de GNA13. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de GNA13.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.