Plásmido Doble Nickase (h) GSTP1: sc-402084-NIC

GSTP1 codifica la glutatión S-transferasa pi 1, una enzima citosólica de desintoxicación de fase II que cataliza la conjugación del glutatión con compuestos electrófilos, contribuyendo al mantenimiento de la homeostasis redox y a la defensa celular frente al estrés oxidativo. GSTP1 participa en el metabolismo de xenobióticos y modula la señalización activada por estrés, incluida la regulación de vías MAPK como JNK mediante interacciones proteína–proteína. La expresión alterada de GSTP1 o la metilación de su promotor se han asociado con cambios en la capacidad antioxidante y en las respuestas celulares al estrés en múltiples contextos relevantes para el cáncer, donde a menudo se estudia como marcador del estado de desintoxicación. Estas funciones hacen de GSTP1 un nodo útil para investigar el estrés metabólico, los mecanismos de respuesta a fármacos y las redes de señalización reguladas por el estado redox en células humanas.

GSTP1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus GSTP1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de GSTP1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de GSTP1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con GSTP1 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.