GSTM3 Double Nickase Plasmid (h): sc-404418-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das GSTM3 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- GSTM3 Double-Nickase-Plasmid (h) und GSTM3 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf GSTM3 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
GSTM3 Double Nickase Plasmid (h) | sc-404418-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
GSTM3 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-404418-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Glutathion-S-Transferase Mu 3 (GSTM3) ist ein zytosolisches Phase-II-Entgiftungsenzym, das die Konjugation von Glutathion an elektrophile Verbindungen katalysiert und damit die zelluläre Abwehr gegen oxidativen Stress und xenobiotische Belastungen unterstützt. Durch die Modulation der Redoxhomöostase und die Verarbeitung von Produkten der Lipidperoxidation beeinflusst GSTM3 Signalwege, die mit der Abpufferung reaktiver Sauerstoffspezies, inflammatorischer Signalgebung und Proteostase verknüpft sind. Veränderungen der GSTM3-Expression oder -Aktivität wurden mit einer veränderten Anfälligkeit für chemikalieninduzierte Schäden sowie mit interindividuellen Unterschieden in Arzneimittel- und Umweltantworten in Verbindung gebracht, was GSTM3 für Studien der Toxikologie und der Biologie der Stressadaptation relevant macht. In der Krebsbiologie und bei chronisch-entzündlichen Konstellationen wird GSTM3 häufig hinsichtlich seines Einflusses auf die Stresstoleranz von Tumorzellen und stoffwechselassoziierte Phänotypen untersucht.
GSTM3 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des GSTM3-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von GSTM3 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die GSTM3-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit GSTM3-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.