Plásmido CRISPR de Activación (h) Grx1: sc-418056-ACT

El gen humano **GLRX** codifica la **glutarredoxina-1 (Grx1)**, una oxidorreductasa citosólica tiol-disulfuro que cataliza la desglutationilación y ayuda a mantener la homeostasis redox celular. Al regular la S-glutationilación de proteínas, Grx1 influye en vías de señalización y de respuesta al estrés vinculadas al metabolismo del glutatión, las defensas antioxidantes y el control redox-sensible de la apoptosis y la inflamación. La actividad de Grx1 repercute en la función mitocondrial, la proteostasis y las respuestas a especies reactivas de oxígeno y nitrógeno, integrándose con programas más amplios de estrés oxidativo. La desregulación de la función de GLRX/Grx1 se ha asociado con el desequilibrio redox observado en múltiples contextos relevantes para enfermedades, incluidos fenotipos de estrés inflamatorio y metabólico y una resiliencia celular alterada frente al daño oxidativo.

Grx1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de GLRX sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Grx1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus GLRX en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional GLRX, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Grx1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo GLRX y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Grx1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Grx1 en células tumorales con expresión de GLRX silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.