Grx1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-418056-ACT

O GLRX humano codifica a glutaredoxina-1 (Grx1), uma oxirredutase tiol-dissulfeto citosólica que catalisa a desglutationilação e ajuda a manter a homeostase redox celular. Ao regular a S-glutationilação de proteínas, a Grx1 influencia vias de sinalização e de resposta ao estresse ligadas ao metabolismo da glutationa, às defesas antioxidantes e ao controle redox-sensível da apoptose e da inflamação. A atividade da Grx1 impacta a função mitocondrial, a proteostase e as respostas a espécies reativas de oxigênio e nitrogênio, integrando-se a programas mais amplos de estresse oxidativo. A desregulação da função GLRX/Grx1 tem sido associada ao desequilíbrio redox observado em múltiplos contextos relevantes para doenças, incluindo fenótipos de estresse inflamatório e metabólico e alterações na resiliência celular a lesões oxidativas.

Grx1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de GLRX sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Grx1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus GLRX em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição GLRX, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Grx1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus GLRX nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Grx1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Grx1 em células tumorais com expressão de GLRX silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.