Plasmide CRISPR/Cas9 KO GRPR (h): sc-401637

Présentation

Le GRPR (récepteur du peptide libérant la gastrine) est un récepteur couplé aux protéines G à sept domaines transmembranaires, qui se lie au peptide libérant la gastrine et à des ligands de type bombésine afin de réguler la mobilisation du calcium intracellulaire et la signalisation en aval via les cascades PLC, PKC et MAPK. L’activité du GRPR influence la prolifération cellulaire, la sécrétion et des processus neuromodulateurs, ce qui l’associe à une régulation dépendante du contexte de la physiologie épithéliale et neuronale. Une expression ou une signalisation altérée du GRPR a été associée à des réseaux de signalisation oncogéniques ainsi qu’à une dérégulation des voies neuroendocrines et gastro-intestinales dans des modèles pertinents pour l’étude des maladies. En tant que récepteur membranaire doté d’une réactivité ligand définie, le GRPR constitue un point d’entrée exploitable pour disséquer la signalisation pilotée par les GPCR, le trafic des récepteurs et les sorties transcriptionnelles.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO GRPR (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène GRPR dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du GRPR, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert GRPR à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine GRPR.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en GRPR pour l'étude de la signalisation de GRPR, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de GRPR essentiels à la fonction de GRPR
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de GRPR pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le GRPR plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le GRPR plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus GRPR. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le GRPR plasmide HDR (h) et le GRPR (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie GRPR pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles GRPR définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.