Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
GPR84 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-401953
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- GPR84 El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico GPR84, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: GPR84 Anticuerpo (1D9): sc-293447
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
GPR84 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-401953 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
GPR84 codifica un receptor acoplado a proteína G que es activado por ácidos grasos de cadena media y se encuentra enriquecido en células de la línea mieloide, vinculando la detección de lípidos con la señalización inmunitaria innata. Tras la estimulación, GPR84 activa vías mediadas por receptores acoplados a proteína G (GPCR) que modulan la señalización de segundos mensajeros y programas transcripcionales posteriores que controlan la producción de citocinas, la quimiotaxis y la activación de macrófagos. Este receptor se ha estudiado en el contexto de la remodelación metabólica asociada a la inflamación y la polarización de células inmunitarias dentro de los microambientes tisulares. Se han descrito alteraciones en la actividad de GPR84 en diversos modelos de enfermedades inflamatorias y fibróticas, lo que respalda su uso como un nodo mecanístico para investigar vías inmunometabólicas.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO GPR84 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen GPR84 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del GPR84 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de GPR84 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína GPR84.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en GPR84 para la investigación de la señalización de GPR84, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de GPR84 críticos para la función de GPR84
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de GPR84 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido GPR84 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido GPR84 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus GPR84. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR GPR84 (h) y el plásmido HDR GPR84 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología GPR84 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana GPR84 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.