Plasmide Double Nickase (h) GPR55: sc-411265-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) GPR55 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide GPR55 Double Nickase (h) et le plasmide GPR55 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant GPR55. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) GPR55 | sc-411265-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) GPR55 | sc-411265-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
GPR55 code pour un récepteur atypique couplé aux protéines G qui répond à des ligands dérivés des lipides et peut s’associer à plusieurs voies de signalisation dépendantes des protéines G afin de réguler la signalisation intracellulaire du Ca²⁺, le remodelage du cytosquelette dépendant de RhoA/ROCK et l’activation de MAPK/ERK. Dans les cellules humaines, la signalisation de GPR55 influence la migration cellulaire, la prolifération et les réponses inflammatoires, avec des rôles rapportés dans la fonction des cellules immunitaires et des interactions (crosstalk) avec des réseaux liés au système endocannabinoïde. Des altérations de l’expression ou de la signalisation de GPR55 ont été associées, dans diverses études, à l’invasivité des cellules cancéreuses, à la signalisation de la douleur neuropathique, à la régulation métabolique et à l’homéostasie osseuse, ce qui en fait une cible utile pour disséquer la biologie des RCPG médiée par les lipides. Ces caractéristiques étayent son utilisation comme nœud de voie pour des recherches mécanistiques en pharmacologie des RCPG et sur les programmes transcriptionnels et phénotypiques en aval.
GPR55 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus GPR55 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de GPR55. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de GPR55. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de GPR55.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.