Particules Lentivirales d'Activation (h2) GPR40: sc-401434-LAC-2

Le FFAR1 (GPR40) humain code un récepteur couplé aux protéines G (RCPG) des acides gras libres à chaîne moyenne et longue, qui se couple principalement à Gαq/11 pour induire l’activation de la phospholipase C, la mobilisation du Ca2+ intracellulaire et les voies de signalisation en aval PKC/MAPK. Dans les cellules β pancréatiques et d’autres tissus à forte activité métabolique, GPR40 agit comme un capteur de nutriments reliant la disponibilité en lipides à des réponses sécrétoires régulées et, plus largement, au contrôle de l’homéostasie glucose–lipides. Des altérations de la signalisation de FFAR1 ont été impliquées dans des dérégulations métaboliques, notamment des défauts de sécrétion d’insuline associés à l’obésité et des phénotypes pertinents pour le diabète de type 2, et ont aussi été explorées dans des contextes tels que l’inflammation et le métabolisme tumoral. L’édition génétique de FFAR1 permet de disséquer les mécanismes de la signalisation acides gras–RCPG, d’examiner le couplage stimulus–sécrétion des cellules β et de cartographier les voies impliquées dans des modèles cellulaires à l’aide d’analyses transcriptomiques, phosphoprotéomiques et d’essais fonctionnels.

Les particules d'activation lentivirales GPR40 (h2) répondent à ce besoin en encapsulant le système complet d'activation transcriptionnelle SAM (Synergistic Activation Mediator) dans des particules lentivirales à titre élevé prêtes à la transduction, permettant une régulation à la hausse efficace de FFAR1 dans un plus large éventail de types de cellules humaines.

Les particules d'activation lentivirales GPR40 (h2) délivrent tous les composants fonctionnels du système médiateur d'activation synergique (SAM) via la transduction lentivirale. Le système comprend trois préparations de particules co-transduites dans les cellules cibles : l'une codant pour une dCas9 catalytiquement inactive (mutations D10A et N863A) fusionnée au domaine de transactivation VP64 avec un gène de résistance à la blasticidine ; une codant pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1 avec un gène de résistance à l'hygromycine ; et une codant pour un ARNsg de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 avec un gène de résistance à la puromycine. Après transduction lentivirale et intégration génomique des cassettes d'expression, les composants du SAM sont exprimés de manière stable et s'assemblent au locus cible dans la région promotrice proximale en amont du site de départ de la transcription FFAR1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de manière coopérative pour recruter l'appareil transcriptionnel endogène et induire une régulation à la hausse soutenue de l'expression endogène de GPR40. L'utilisation de dCas9 inactif sur les nucléases évite l'introduction de cassures double brin de l'ADN et préserve le locus génomique natif FFAR1 ainsi que l'architecture régulatrice.

Le format lentiviral offre plusieurs avantages pratiques : l'intégration génomique stable permet une activation héréditaire au fil des divisions cellulaires ; les préparations de particules à titre élevé éliminent le besoin d'une production virale en interne ; et la compatibilité avec les types de cellules primaires, non divisibles et résistantes à la transfection élargit l'accessibilité expérimentale. Le succès de la transduction peut être confirmé et renforcé par une triple sélection antibiotique utilisant la puromycine, l'hygromycine et la blasticidine.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.