GPR40 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-401434

Descripción general

FFAR1 codifica el receptor de ácidos grasos libres 1 (GPR40), un receptor acoplado a proteína G activado por ácidos grasos de cadena media y larga, que se acopla principalmente a la señalización Gq/11. Tras su activación, GPR40 promueve la actividad de la fosfolipasa C, la movilización de calcio intracelular y vías de quinasas aguas abajo que regulan el acoplamiento estímulo-secreción y las respuestas metabólicas celulares. En los islotes pancreáticos y otros tejidos metabólicos relacionados, este receptor integra señales derivadas de lípidos con la detección de nutrientes para influir en la dinámica de secreción de insulina y en redes más amplias de homeostasis de la glucosa. La desregulación de la señalización de FFAR1/GPR40 se ha asociado con fenotipos vinculados a enfermedades metabólicas, incluida la alteración de la función de las células beta y la señalización inflamatoria impulsada por lípidos, lo que respalda su relevancia para estudios mecanísticos en investigación sobre diabetes y obesidad.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO GPR40 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen FFAR1 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del FFAR1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de FFAR1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína GPR40.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en FFAR1 para la investigación de la señalización de GPR40, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de FFAR1 críticos para la función de GPR40
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de FFAR1 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido GPR40 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido GPR40 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus FFAR1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR GPR40 (h) y el plásmido HDR GPR40 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología FFAR1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana FFAR1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.