GPR4 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-403659

Descripción general

GPR4 codifica un receptor acoplado a proteína G sensible a protones que actúa como sensor celular de pH, traduciendo la acidosis extracelular en señalización intracelular. Tras su activación, GPR4 se acopla a proteínas G heterotriméricas para modular las vías dependientes de AMPc/PKA y de la fosfolipasa C, influyendo en el flujo de calcio, la dinámica del citoesqueleto y programas transcripcionales vinculados al comportamiento de células endoteliales e inmunitarias. Su expresión está enriquecida en contextos vasculares e inflamatorios, donde son comunes los microambientes ácidos, y se ha estudiado en relación con la activación endotelial, el reclutamiento de leucocitos y las respuestas tisulares a la hipoxia y la inflamación. La alteración de la señalización de GPR4 se ha asociado con una desregulación de la señalización inflamatoria y de las respuestas al estrés del microambiente, relevantes para la biología de enfermedades cardiovasculares y mediadas por el sistema inmunitario.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO GPR4 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen GPR4 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del GPR4 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de GPR4 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína GPR4.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en GPR4 para la investigación de la señalización de GPR4, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de GPR4 críticos para la función de GPR4
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de GPR4 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido GPR4 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido GPR4 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus GPR4. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR GPR4 (h) y el plásmido HDR GPR4 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología GPR4 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana GPR4 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.