Plásmido CRISPR de Activación (h) GPR20: sc-407471-ACT

GPR20 codifica un receptor huérfano de la clase A acoplado a proteína G, vinculado predominantemente a la biología neuronal y neuroendocrina, donde se cree que modula la señalización mediada por receptores que influye en la dinámica del AMPc, la actividad de MAPK y los programas de transcripción posteriores. Como GPCR de membrana, GPR20 puede modular la comunicación célula–célula y las redes de señalización sensibles a estímulos que coordinan la diferenciación, la excitabilidad y los procesos secretorios en contextos celulares relevantes. Las alteraciones en la señalización de los GPCR se asocian ampliamente con fenotipos neuropsiquiátricos y metabólicos, lo que convierte a GPR20 en una diana útil para desentrañar la conectividad de las vías y los estados reguladores impulsados por receptores. Por ello, el GPR20 humano es de interés para estudios mecanísticos de la transducción de señales asociada a GPCR y para cartografiar los efectos en redes génicas en sistemas modelo relevantes para enfermedades.

GPR20 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de GPR20 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

GPR20 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus GPR20 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional GPR20, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de GPR20. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo GPR20 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de GPR20 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía GPR20 en células tumorales con expresión de GPR20 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.