Plasmide CRISPR/Cas9 KO GPR171 (h): sc-412047

Présentation

GPR171 code un récepteur couplé aux protéines G (GPCR) orphelin de classe A (de type rhodopsine), principalement associé à une signalisation inhibitrice, et impliqué dans la modulation de l’AMPc intracellulaire ainsi que des programmes transcriptionnels en aval. Il est exprimé dans des contextes immunitaires et neuronaux, où il a été associé à la régulation du tonus des voies de signalisation cellulaire, des circuits neuromodulateurs et de la réactivité inflammatoire. Des interactions rapportées avec le neuropeptide BigLEN suggèrent un rôle dans la signalisation GPCR médiée par des peptides et dans le contrôle, à l’échelle des réseaux, des états d’activation cellulaire. Une signalisation GPCR altérée impliquant GPR171 a été étudiée en lien avec des phénotypes neurocomportementaux et la régulation immunitaire, ce qui étaye sa pertinence pour des études au niveau des voies de transduction du signal médiées par les récepteurs.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO GPR171 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène GPR171 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du GPR171, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert GPR171 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine GPR171.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en GPR171 pour l'étude de la signalisation de GPR171, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de GPR171 essentiels à la fonction de GPR171
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de GPR171 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le GPR171 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le GPR171 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus GPR171. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le GPR171 plasmide HDR (h) et le GPR171 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie GPR171 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles GPR171 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.