Plasmide CRISPR/Cas9 KO GPR126 (h): sc-407085

Présentation

ADGRG6 (GPR126) code un récepteur d’adhérence couplé aux protéines G qui intègre des signaux provenant de la matrice extracellulaire et des interactions cellule–cellule afin de réguler la signalisation via les protéines G hétérotrimériques, notamment les voies dépendantes de l’AMPc/PKA. GPR126 est un régulateur clé du développement des cellules de Schwann et de la myélinisation, et contribue à la maturation des nerfs périphériques, avec des rôles supplémentaires dans la biologie du cartilage, la croissance squelettique et le développement vasculaire. Grâce à son large domaine extracellulaire et à son autoprotéolyse au niveau du site de protéolyse des GPCR, GPR126 module des programmes de signalisation mécanoréactifs et développementaux. Des perturbations génétiques et fonctionnelles d’ADGRG6 ont été associées à des phénotypes neurodéveloppementaux et musculosquelettiques, soulignant sa pertinence pour l’étude de la myélinisation, de la différenciation cellulaire et de la morphogenèse tissulaire.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO GPR126 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène ADGRG6 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du ADGRG6, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert ADGRG6 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine GPR126.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en ADGRG6 pour l'étude de la signalisation de GPR126, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de ADGRG6 essentiels à la fonction de GPR126
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de ADGRG6 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le GPR126 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le GPR126 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus ADGRG6. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le GPR126 plasmide HDR (h) et le GPR126 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie ADGRG6 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles ADGRG6 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.