Partículas Lentivirales de Activación (h) GPR105: sc-405954-LAC

P2RY14 (GPR105) codifica un GPCR purinérgico acoplado a Gi que detecta UDP-azúcares extracelulares como la UDP-glucosa y la UDP-galactosa, conectando la liberación de azúcares nucleotídicos con la señalización inmunitaria y epitelial. La activación del receptor suele suprimir el AMPc y puede modular programas de MAPK/ERK y de quimiotaxis, influyendo en el reclutamiento de leucocitos, las respuestas de citocinas y la inflamación asociada a la barrera. La actividad de GPR105 se cruza con la señalización purinérgica de peligro en contextos de estrés tisular y exposición microbiana, lo que la hace relevante para estudios de redes inflamatorias y de la comunicación en el microambiente tumoral-inmunitario. Se han asociado alteraciones en la expresión de P2RY14 y en el acoplamiento de sus vías con respuestas mieloides y epiteliales desreguladas, lo que respalda su investigación en modelos de inmunología, fibrosis y biología del cáncer.

Las partículas de activación lentiviral GPR105 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de P2RY14 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral GPR105 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción P2RY14, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de GPR105. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo P2RY14 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.