Plásmido Doble Nickase (h) GP78: sc-402346-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)GP78 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa GP78 (h) y el plásmido de doble nickasa GP78 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a AMFR. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: GP78 Anticuerpo (3D9): sc-293371
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) GP78 | sc-402346-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) GP78 | sc-402346-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
El gen humano **AMFR** codifica **GP78**, una ligasa E3 de ubiquitina tipo RING residente en el retículo endoplásmico (RE), fundamental para la degradación asociada al RE (ERAD) y para el control de la proteostasis por el sistema ubiquitina–proteasoma. GP78 coopera con enzimas E2 y con componentes de ERAD para ubiquitinar sustratos mal plegados o regulados, influyendo en la señalización de la respuesta a proteínas mal plegadas, la homeostasis de lípidos y colesterol, y una adaptación más amplia al estrés celular. A través de estos procesos, AMFR/GP78 se ha estudiado en contextos de estrés crónico del RE, recambio proteico alterado y vías vinculadas a la señalización oncogénica y a fenotipos asociados a la metástasis en sistemas modelo. Su función en el control de calidad mediado por ubiquitina también se entrecruza con la dinámica mitocondrial y el diálogo con la autofagia, lo que lo hace relevante para desentrañar redes de respuesta al estrés.
GP78 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus AMFR en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de AMFR. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de AMFR. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con AMFR alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.