golgin 97 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-403152-ACT

GOLGA1 kodiert Golgin‑97, ein peripheres Membranprotein mit Coiled‑Coil-Struktur, das am trans‑Golgi‑Netzwerk (TGN) angereichert ist, zur Aufrechterhaltung der Golgi‑Architektur beiträgt und das Andocken von Vesikeln während des post‑Golgi‑Transports unterstützt. Durch die Koordination der Fracht‑Sortierung und retrograder Transportwege zwischen Golgi, Endosomen und Plasmamembran trägt Golgin‑97 zur Membranhomöostase und zur Genauigkeit der Organisation des sekretorischen Weges bei. Störungen von Golgi‑Tethering‑ und Trafficking‑Faktoren werden mit verändertem Rezeptor‑Recycling, Stressantworten und Fehlverortung von Glykosylierungsenzymen in Verbindung gebracht – Prozesse, die häufig in der Neurodegeneration, Infektionsbiologie und bei Krebszell‑Phänotypen untersucht werden. Als Marker und Regulator der TGN‑Dynamik wird Golgin‑97 häufig in Assays zur Organellenstruktur, zur Kinetik des vesikulären Transports und zur Proteostase unter zellulärem Stress untersucht.

golgin 97 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen GOLGA1-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

golgin 97 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des GOLGA1-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der GOLGA1-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen golgin 97-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native GOLGA1-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von golgin 97-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des golgin 97-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem GOLGA1-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.