Plasmide CRISPR d'Activation (h) GNPDA2: sc-417433-ACT

Le gène humain **GNPDA2** (glucosamine-6-phosphate désaminase 2) code une enzyme cytosolique qui catalyse la conversion réversible de la glucosamine-6-phosphate en fructose-6-phosphate et ammoniac, reliant la voie de biosynthèse des hexosamines au flux glycolytique central. En modulant la disponibilité de l’UDP-GlcNAc pour la glycosylation des protéines liée à l’azote (N) et à l’oxygène (O), GNPDA2 peut influencer la détection des nutriments, la protéostasie et des processus de signalisation dépendant d’une régulation médiée par les glycannes. Des études génétiques et fonctionnelles ont associé GNPDA2 à des phénotypes métaboliques, notamment l’indice de masse corporelle et le risque d’obésité, soulignant sa pertinence dans des voies qui gouvernent l’homéostasie énergétique et le métabolisme sensible à l’insuline. Ces caractéristiques font de GNPDA2 une cible utile pour étudier comment la dynamique de la voie des hexosamines affecte la croissance cellulaire, les réponses au stress et le remaniement métabolique dans des systèmes modèles humains.

GNPDA2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de GNPDA2 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

GNPDA2 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus GNPDA2 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription GNPDA2, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de GNPDA2. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus GNPDA2 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de GNPDA2 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie GNPDA2 dans les cellules tumorales présentant une expression de GNPDA2 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.