Plasmide Double Nickase (m) GM-CSF: sc-419840-NIC

Le gène murin Csf2 code le facteur de stimulation des colonies de granulocytes et de macrophages (GM-CSF), une cytokine qui régule le développement de la lignée myéloïde ainsi que l’activation fonctionnelle des monocytes, des macrophages et des cellules dendritiques. La signalisation du GM-CSF mobilise des complexes du récepteur au GM-CSF afin d’activer les voies JAK2/STAT5, MAPK/ERK et PI3K/AKT, coordonnant la survie, la prolifération, la différenciation cellulaires et la production de médiateurs inflammatoires. In vivo, une activité modifiée du GM-CSF influence l’hématopoïèse, la présentation d’antigènes et le niveau basal d’inflammation tissulaire, faisant de Csf2 un nœud clé dans des modèles d’auto-immunité, de neuroinflammation, d’inflammation allergique des voies aériennes et de pathologies induites par les cellules myéloïdes. Ces propriétés étayent des études mécanistiques des réseaux de cytokines et du dialogue entre immunité innée et adaptative dans des systèmes murins.

GM-CSF Le plasmide double nickase (m) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus Csf2 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de Csf2. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de Csf2. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.

Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de Csf2.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.